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尊龙凯时DNA提取试剂盒操作指南

来源:潘巧妍 日期:2025-03-18

全套操作大约需要1小时,包括匀浆、细胞裂解、去蛋白、DNA纯化等步骤,具体说明如下:

尊龙凯时DNA提取试剂盒操作指南

匀浆和细胞裂解

根据不同实验材料的要求,应采取特定的匀浆步骤,具体如下:

从动物组织中提取基因组DNA

使用研钵进行匀浆时:

  1. 取1〜100mg动物组织或人组织放入冰浴预冷的研钵中,迅速而用力地研磨成匀浆。请注意,以下组织需用液氮研磨成粉末:
    A. 富含DNA酶的组织,如胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等;
    B. 富含胶原蛋白的组织,如皮肤、肌腱等;
    C. 富含角质蛋白或坚硬组织(如骨骼)。
  2. 加入650μl的Solution A和0.9μl的RNase A,轻柔研磨30秒。注意:使用上述①中提到的组织时,加入Solution A和RNase A后将研钵置于65℃水浴中研磨1分钟。
  3. 将650μl的匀浆液转移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650μl,请补充Solution A至650μl,并在65℃水浴中保温5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时:

  1. 取1〜100mg动物组织或人组织放入冰浴预冷的Collection Tube中,用研磨棒快速研磨成糊状。
  2. 加入350μl的Solution A和0.9μl的RNase A,然后用研磨棒快速研磨成匀浆。
  3. 再加入350μl的Solution A,把研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分混合后于65℃保温5分钟。

从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA

  1. 按下表称取适量的新鲜植物材料(如使用冷冻干燥材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品完全冷冻后快速研磨成粉末。在研磨过程中应间歇加入液氮以防物料融化。
  2. 研磨后,转移至65℃水浴,待样品粉末稍微融化时,加入700μl的Solution A和12μl的RNase A,用力碾磨30秒。
  3. 将650μl的匀浆转移至Collection Tube中,如体积不足650μl,请补充Solution A并在65℃保温15分钟。

从全血中提取基因组DNA

  1. 取10〜250μl全血(含抗凝剂)加入Collection Tube中。
  2. 加入500μl的Solution A。
  3. 加入1μl的RNase A,强力振荡15秒后冰浴5分钟。注意:处理人和动物的抗凝全血量不超过250μl,禽类及两栖类的量为≤10μl。

从培养细胞中提取基因组DNA

  1. 使用Collection Tube收集1×105至1.5×107的细胞悬液,5,000rpm离心5分钟,弃去上清液。
  2. 加入150μl灭菌蒸馏水或PBS重悬细胞。
  3. 加入500μl的Solution A和0.8μl的RNase A,激烈振荡15秒后在室温静置1分钟。

通过遵循上述步骤,您将能够有效提取基因组DNA,确保结果的准确性和可靠性,尊龙凯时为您的实验室提供优质的实验材料和服务,助力科研事业的进步。

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